授粉最好在每天8：00-11：00进行，雌花开放后5天之内均可进行授粉，但随着开放时间的延长，授粉受精后果实内的种子数、果个会逐渐下降，因此以花开放后1～2 天授粉效果最好，具体方法如下：
对花授粉：晴天上午10：00以前采集当天早晨刚开放的雄花，用雄花的雄蕊轻轻在雌花柱头上涂抹，每朵雄花可授7～8朵雌花；对花授粉速度慢，但授粉效果却是人工授粉中最好的。
散花授粉：上午6：00-8：00收集当天开放的雄花花药，在9：00-11：00之间用鸡毛或毛笔轻轻弹撒在雌花柱头上即可。
简易授粉器授粉：将采集的花粉用滑石粉稀释5～10倍，装入塑料瓶中，瓶盖上插通气管，将花粉吹向柱头即可。
蜜蜂授粉：猕猴桃花没有蜜腺，对蜜蜂的吸引力不大，所以蜜蜂授粉时需要的蜂量较大，大致每1334 平方米猕猴桃园放有1箱蜂（每箱有不少于3万头的蜜蜂）；一般在10%的雌花开放时将蜂箱（放置在向阳处）移入园内即可。
检查补授：授过粉的雌花24小时后柱头颜色为淡黄色，未授粉成功的花柱头是乳白色，需补充授粉，连续进行2～3天即可结束。
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